Термостабильная каталаза

М-100 раствора NaN03 в М/45 фосфатного буфера (рН 7,0), встряхивают и на 2 часа помещают в термостат. Затем добавляют 1 каплю раствора концентрированной соляной кислоты (1:2), 2 капли 0,2% водного раствора сульфаниламида и 2 капли 0,1 % водного раствора N-нафтил этилендиаминодигидрохлорида. Микобактерии туберкулеза дают положительную реакцию, т. е. образуют из нитратов нитриты, что выражается появлением розовой или красной окраски. При отрицательной реакции, когда цвет не изменился, рекомендуется провести контроль. В пробирку добавляют цинк, который восстанавливает нитрат. Если после добавления цинка появится розовое или красное окрашивание — реакция была проведена правильно. Комбинированное определение ниацина и редукции нитратов по Бараускене (1972). В исследуемую культуру наливают 2 мл 0,01 М раствора нитрата натрия и экстрагируют 15 минут при комнатной температуре; 0,5 мл экстракта переносят в пробирку, в которой определяют ниацин; добавляют 0,5 мл 5% раствора хлорамина и 0,5 мл 1 % раствора цианистого калия. Ниацин дает ярко-желтое окрашивание. Дегазацию производят добавлением 20% хлорной извести. Затем для редукции нитратов ту же пробирку с культурой и раствором нитрата натрия ставят на 2 часа на водяную баню при 37°. Предварительно стеклянной палочкой растирают несколько колоний. После прогрева в пробирку добавляют 0,5 мл сульфониловой кислоты (сульфониловая кислота 1,0 г, ледяная уксусная кислота 25 мл, дистиллированная вода 75 мл) и 0,5 мл раствора нафтиламина (а-нафтиламин 0,3 г, ледяная уксусная кислота 20 мл, дистиллированная вода 80 мл). Регистрируют реакцию через час. Положительная реакция, т. е. при редукции нитратов, дает окрашивание от розового до темно-красного.

Комментарии запрещены.

Почему мы не здоровы